جزئیات مولکولی یک فرایند بیوشیمیایی را تا زمان جداسازی و تشخیص مولکول های واکنش دهنده نمی توان توضیح داد. از این رو شناخت ما از اصول پایه بیوشیمیایی همزان با توسعه روش های جداسازی و شناسایی بیومولکولها، افزایش یافته است. کروماتوگرافی، موثرترین روش جدا سازی و تخلیص تمام انواع بیومولکول بوده است. علاوه بر این از این روش به شکلی گسترده به عنوان یک ابزار تحلیلی استفاده می شود.

مقدمه ای بر کروماتوگرافی

همه انواع کروکاتوگرافی بر پایه اصولی بسیار ساده هستند. برای نمونه مورد بررسی (سولوت) امکان واکنش با دو ویژگی متمایز فراهم می شود. یک فاز متحرک و یک فاز ثابت. فاز متحرک که ممکن است یک گاز یا مایع باشد، نمونه را از یک منطقه حاوی فاز ثابت جامد یا گاز به نام سورنبت عبور می دهد. فاز ثابت در اینجا به طور مفصل توضیح داده نمی شود. چرا که در میان روش های مختلف کروماتوگرافی متفاوت است. با این حال می توان ان را دارای قابلیت «اتصال» به برخی انواع سولوت در نظر گرفت. نمونه که ممکن است حاوی یک یا چند ترکیب مولکولی باشد، با فاز ثابت تماس می یابد. این ترکیبات در میان فاز ثابت و متحرک توزیع می شوند. چنانچه برخی از ترکیبات نمونه ترجیحا به فاز ثابت بچسبند، زمان بیشتری را در فاز ثابت صرف کرده و از این رو حرکت آن ها در سیستم کروماتوگرافی با کندی صورت می گیرد. مولکول هایی که گرایش ضعیفی به فاژ ثابت دارند. زمان بیشتری را در فاز متحرک صرف کرده و سریعتر از سیستم عبور می کنند. بسیاری از فعل و انفعالاتی که در بین مولکول های سولوت وف از ثابت رخ می دهد به علت تمایل متفاوت به فاز ثابت موجب جداسازی مولکول ها می شوند. فرایند کلی عبور یک ترکیب سولوت از یک سیستم کروماتوگرافی پیشرفت نامیده می شود.

فاز متحرک را می توان به عنوان تابعی از زمان در انتهای سیستم کروماتوگرافی جمع آوری نمود. فاز متحرک که حالا برون ریز نامیده می شود حاوی مولکول های سولوت است. چنانچه فرایند کروماتوگرافی موثر بوده باشد بخش های جمع آوری شده در زمان های مختلف حاوی ترکیبات مختلف نمونه اصلی خواهند بود. به طور خلاصه مولکول ها به علت تفاوت در میزان توزیع میان فاز ثابت و فاز متحرک جدا می شوند.

در طول این فصل و فصول دیگر روش های بیوشیمیایی به عنوان آماده کننده یا تحلیلی یا هر دو مشخص می شوند. روش آماده کننده روشی است که می توان از آن برای تخلیص یک ماده بیولوژیکی نسبتا بزرگ استفاده کرد.

برای دریافت متن کامل ان بصورت pdf کلیک کنید .